La regulación al alza de las vías de los antioxidantes y la autofagia mediante la activación de NRF2 protege a las neuronas de la médula espinal del daño causado por el ozono

La ozonoterapia puede aliviar múltiples tipos de dolor, pero presenta neurotoxicidad potencial, cuyo mecanismo no está claro. El presente estudio tuvo como objetivo identificar la función del factor nuclear (derivado del eritroide 2) relacionado con el factor 2 (NRF2) en la prevención de las lesiones de la médula espinal causadas por una sobredosis de ozono. Se extrajeron células neuronales primarias de ratas Wistar recién nacidas y se autenticaron mediante inmunofluorescencia utilizando la proteína 2 asociada a los antimicrotúbulos como marcador específico del tipo celular. Ensayo de viabilidad celular con diferentes concentraciones de ozono (0, 10, 20, 30 y 40 μ g / ml) se utilizó para determinar la concentración que provocó una lesión de la neurona primaria; 30 min de 40 µLa ozonoterapia g / ml redujo notablemente la viabilidad celular al 71%. Para probar los efectos del ozono, las células se dividieron en cinco grupos de tratamiento [0-, 30 y 40 μ g / ml de ozono, terc-butilhidroquinona (TBHQ) + 40 μ g / ml de ozono (T40) y TBHQ ( T0)]. Las células en los grupos T40 y T0 recibieron 40 μ mol / l tBHQ en el quinto día de cultivo SCN. La PCR cuantitativa con transcripción inversa y la transferencia Western mostraron que los niveles de expresión de proteínas de hemo oxigenasa-1 (HO-1) y los niveles de expresión de ARNm de HO-1 y NRF2 estaban disminuidos. Los niveles de expresión de NRF2, proteína de unión a ubiquitina p62 y proteínas asociadas a microtúbulos 1A / 1B de cadena ligera 3B disminuyeron después del tratamiento con 40 µg / ml de ozono. La inmunofluorescencia mostró que NRF2 niveles de expresión nuclear también disminuyeron tras 40 μ g / ml tratamiento con ozono. Sin embargo, las células del grupo T40 no mostraron niveles reducidos de expresión nuclear de NRF2. Normal / apoptótica / celular necrótica kit de detección reveló que la tasa de necrosis aumentó después del tratamiento con 40 μ g / ml de ozono; sin embargo, el grupo T40 no mostró este aumento de necrosis. En 40 μ g / ml, el ozono aumentó la médula espinal neurona muerte (SCN) in vitro . Además, el tratamiento con 40 µg / ml de SCN dañados por ozono. La vía del elemento de respuesta p62 / NRF2 / antioxidante previno tal lesión. La tBHQ activó esta vía, incrementó la autofagia y aumentó la concentración de NRF2 nuclear local, mejorando así el sistema antioxidante para proteger a los SCN de las lesiones causadas por altas concentraciones de ozono.

Autores:
Cong Zhang, Shulin Ma, Xu Zhao, Bei Wen, Panpan Sun, Zhijian Fu